""DNA-sorb-S-M" ® AmpliSens FBUN Central Research Institute of Epidemiology of Rospotrebnadzor, Kun til forskning Russisk Føderation, 111123, og andre ikke-medicinske formål, Moskva, ..."

INSTRUKTIONER

om brugen af ​​reagenssættet

til DNA-ekstraktion fra biologisk materiale

"DNA-sorb-S-M"

AmpliSense

FBUN Central Research Institute of Epidemiology

Rospotrebnadzor,

Kun til forskningsformål

Russiske Føderation, 111123,

og andre ikke-medicinske formål

Moskva by, Novogireevskaya gade, bygning 3A

LISTE OVER FORKORTELSER

FORMÅL

METODENS PRINCIP

FORMER FOR UDFYLDELSE

UDTREKNING AF DNA FRA BIOLOGISK MATERIALE FRA DYR................ 8

DYREFODER ELLER PLANTERÅVARER

SYMBOLER ANVENDES I TRYKTE PRODUKTER

Form 1: REF K1-6-50-Mod / VER 27/12/16 / side 2 af 15

LISTE OVER FORKORTELSER

I denne manual bruges følgende forkortelser og symboler:

DNA – deoxyribonukleinsyre NA – nukleinsyrer OK – negativ ekstraktionskontrol NCO – negativ kontrolprøve PC – positiv ekstraktionskontrol PKO – positiv kontrolprøve PCR – polymerasekædereaktion

- Føderale statsfinansieret organisation Videnskaber

FBUN Centralforskningsinstitut

"Centralt Forskningsinstitut for Epidemiologi og Epidemiologi" Føderal tjeneste til tilsyn inden for Rospotrebnadzor til beskyttelse af forbrugerrettigheder og menneskers velvære

FORMÅL

"DNA-sorb-S-M" reagenssættet er beregnet til DNA-ekstraktion fra biologisk materiale fra dyr: væv (biopsi (hud og slimhinder) genitourinært system mave-tarmkanalen, bronkier), kirurgisk og obduktionsmateriale; og DNA-ekstraktion fra fødevarer, biologiske tilsætningsstoffer, dyrefoder eller plantematerialer til efterfølgende forskning ved hjælp af polymerasekædereaktion (PCR).

DNA-ekstraktion er en præanalytisk procedure af PCR-metoden.

Volumen af ​​testprøven til ekstraktion: 100 µl (prøver med et volumen på 10 til 100 µl eller vejer fra 10 til 100 mg er tilladt)1.

OPMÆRKSOMHED! For information om indsamlingsproceduren, betingelser for transport og opbevaring af testmaterialet, behovet og proceduren for dets klargøring til DNA-ekstraktion samt information om interfererende stoffer og restriktioner forbundet med prøven, se instruktionerne til amplifikationsreagenssættet Brugt.

METODENS PRINCIP

Testprøven2 behandles med en lyseringsopløsning indeholdende proteinase K, hvilket resulterer i destruktion cellemembraner, frigivelse af NK og cellulære komponenter. Opløste NC'er binder til sorbentpartikler, mens andre komponenter i det lyserede testmateriale forbliver i opløsning og fjernes under sorbentfældning. Afhængigt af materialet, der testes, se instruktionerne til det anvendte amplifikationsreagenssæt.

Nogle typer biologisk materiale kræver et prøveforberedelsestrin. Cm.

instruktioner til det reagenssæt, der bruges til amplifikation.

Form 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / side 3 af 15 ved centrifugering og efterfølgende vask af sorbenten. Når en elueringsbuffer tilsættes til sorbenten, passerer NC fra silicaoverfladen ind i opløsningen, som adskilles fra sorbentpartiklerne ved centrifugering. Som et resultat af denne procedure opnås et højt oprenset NA-præparat, fri forer, hvilket sikrer høj analytisk følsomhed af PCR-undersøgelsen.

FORMER FOR UDFYLDELSE

Reagenssættet fås i 2 konfigurationer:

Form 1 inkluderer et sæt reagenser "DNA-sorb-S-M" version 50.

Form 2 inkluderer et sæt reagenser "DNA-sorb-S-M" version 100.

FORHOLDSREGLER OG OPLYSNINGER OM BORTSKAFFELSE

Ved undersøgelse af biologisk materiale fra dyr skal arbejdet udføres i overensstemmelse med reglerne fra Ministeriet for Landbrug og Petroleum i Den Russiske Føderation af 27. januar 1997 nr. 13-7-2/840 "Regler for udførelse af arbejde inden for diagnostik laboratorier, der anvender polymerasekædereaktionsmetoden. Grundlæggende bestemmelser”, godkendt af Institut for Veterinærmedicin.

Ved forskning i fødevarer, biologiske tilsætningsstoffer, dyrefoder eller plantematerialer skal arbejdet udføres i overensstemmelse med kravene metodiske instruktioner MU 1.3.2569-09 "Organisering af laboratoriernes arbejde ved hjælp af amplifikationsmetoder nukleinsyrer når du arbejder med materiale, der indeholder mikroorganismer af patogenicitetsgruppe I–IV" og GOST R 53214-2008 "Fødevarer. Analysemetoder til påvisning af genetisk modificerede organismer og produkter afledt af dem.

Generelle krav og definitioner."

Når du arbejder, skal du altid overholde følgende krav:

– Laboratorieprocessen bør være ensrettet. Analysen udføres i separate rum (zoner). Arbejdet bør begynde i ekstraktionszonen og fortsætte i amplifikations- og detektionszonen. Returner ikke prøver, udstyr eller reagenser til det område, hvor et tidligere procestrin blev udført.

– Ubrugte reagenser, reagenser med udløbet udløbsdato, samt formular 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / side 4 af 15 brugte reagenser, emballage3, biologisk materiale, herunder materialer, instrumenter og genstande kontamineret med biologisk materiale, bør være bortskaffes i overensstemmelse med kravene i SanPiN 2.1.7.2790-10 "Sanitære og epidemiologiske krav til håndtering af medicinsk affald."

– Brug og skift engangsspidser til automatiske filterpipetter ved hver operation4. Engangs plastik fade skal bortskaffes i en særlig beholder indeholdende et desinfektionsmiddel, der kan bruges til desinfektion medicinsk affald.

– Skåle (mortere og støde) og metalinstrumenter (skalpeller, sakse, pincet, blendertilbehør osv.), der bruges til prøveforberedelse, opbevares i en desinfektionsopløsning (f.eks. 0,2 % opløsning af natriumsalt af dichlorisocyanursyre) i en time , vasket med postevand med overfladeaktive rengøringsmidler og, efter vask i rindende og deioniseret vand, tørret i en tørvarmeovn i 4 timer ved en temperatur på 180 C.

– Reagenssættet er beregnet til engangsbrug til at udføre undersøgelsen af ​​det specificerede antal prøver (se afsnittet "Sammensætning").

– Reagenssættet er klar til brug i henhold til disse instruktioner.

Brug reagenssættet udelukkende til dets tilsigtede formål.

– Brug ikke reagenssættet, hvis den indre emballage er beskadiget eller udseende Reagenset svarer ikke til beskrivelsen.

– Brug ikke reagenssættet, hvis transport- og opbevaringsbetingelserne i henhold til instruktionerne ikke følges.

Ubrugte reagenser, udløbne reagenser, brugte reagenser og emballage tilhører fareklasse G for medicinsk affald.

Engangsspidser uden filter bruges til at fjerne supernatanten under ekstraktionsprocessen ved hjælp af en vakuumaspirator.

Form 1: REF K1-6-50-Mod / VER 27/12/16 / side 5 af 15

– Brug ikke reagenssættet efter udløbsdatoen.

– Brug pudderfri engangshandsker, laboratoriefrakker og øjenbeskyttelse, når du arbejder med prøver og reagenser. Vask dine hænder grundigt efter endt arbejde. Alle operationer udføres kun med handsker for at undgå kontakt med den menneskelige krop.

– Undgå indånding af dampe, kontakt med hud, øjne og slimhinder, undlad at synke. I tilfælde af kontakt, skyl straks det berørte område med vand og søg om nødvendigt læge. lægebehandling.

– Reagenssikkerhedsdatablade (SDS – sikkerhedsdatablad) er tilgængelige efter anmodning.

Vurdering af sandsynlige hændelser, der kan resultere i negative konsekvenser for den menneskelige krop:

Når det bruges efter hensigten, og ovenstående forholdsregler følges, er kontakt med den menneskelige krop udelukket.

På nødsituationer følgende er muligt:

- irritation af slimhinden i øjnene hos følsomme personer,

– hudirritation hos følsomme personer,

– Allergisk reaktion,

– skade ved indånding,

- Skadelig ved oral indtagelse.

Specifikke virkninger af reagenssættet på den menneskelige krop:

– Der er ingen kræftfremkaldende effekt.

– Der er ingen mutagen effekt.

– Ingen reproduktionstoksicitet.

YDERLIGERE MATERIALER OG UDSTYR

(angiver producenter/leverandører):

1. 1,5 og 5,0 mL engangsrør af polypropylen, som skrues på eller tætslutter (f.eks. Axygen, Inc.

("Exigen, Inc"), USA eller lignende).

2. Engangsspidser til pipetter med variabel volumen med et filter på op til 200 og op til 1000 µl (f.eks. Axygen, Inc., USA eller lignende).

3. Engangsspidser til pipetter med variabel volumen op til 200 µl (f.eks. Axygen, Inc., USA eller lignende).

Form 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / side 6 af 15

4. Stativ til 1,5 ml rør (f.eks. Axygen, Inc., USA eller lignende).

5. Laminar flow hætte, biologisk sikkerhedsklasse II type A (f.eks. "BAVp-01-"Laminar-S"-1,2", JSC "Laminar Systems", Rusland eller lignende).

6. Termostat til Eppendorf-rør fra 25 til 100 °C (f.eks. SIA Biosan, Letland eller lignende).

7. Termostat-ryster til Eppendorf-rør fra 25 til 100 °C (f.eks. TS-100, SIA Biosan, Letland eller lignende).

8. Mikrocentrifuge til Eppendorf-rør med maksimal hastighed centrifugering på mindst 12 tusind g (for eksempel MiniSpin, Eppendorf (Eppendorf Manufacturing Corporation), Manufacturing Corporation Germany eller lignende).

9. Vortex (f.eks. SIA Biosan, Letland eller lignende).

10. Medicinsk vakuumsuger med en fældekolbe til fjernelse af supernatantvæske (f.eks. "OM-1", LLC "Utes", Rusland eller lignende).

11. Automatiske dispensere med variabel volumen (f.eks. Biohit LLC, Rusland eller lignende).

12. Køleskab fra 2 til 8 ° C fryser fra minus 24 til minus 16 C.

13.Separat morgenkåbe, hatte, sko og engangshandsker i henhold til MU 1.3.2569-09.

14.Engangs plastikbeholdere til bortskaffelse og inaktivering af materialer.

–  –  –

EKSTRAKTION AF DNA FRA BIOLOGISK MATERIALE FRA DYR

2. Vælg det påkrævede antal 1,5 ml engangspolypropylenrør med skrue eller tætsluttende hætter (inklusive negative og positive ekstraktionskontroller, hvis de leveres til PCR-undersøgelsen).

Når lysereagensbufferen og vaskeopløsning 1 opbevares ved en temperatur på 2 til 8 C, er dannelsen af ​​et bundfald i form af krystaller mulig.

Form 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / side 8 af 15

3. Tilsæt 10 µl BKO6 til hvert rør (hvis det leveres til PCR-forskning). Tilsæt 400 µl lysereagensbuffer og 17 µl lysereagens til rørene.

4. Tilsæt 100 µl af testprøverne6 i de forberedte rør ved at bruge en separat spids med et filter til hver prøve.

OPMÆRKSOMHED! 400 µl buffer til lyseringsreagens og 17 µl lysereagens kan tilsættes til et rør med den nødvendige mængde af testprøven, og 10 µl BKO7 kan tilsættes der (hvis det leveres til PCR-forskning), ved hjælp af separate spidser med et filter.

5. Tilsæt 100 μl NCO til det negative kontrol (NC) ekstraktionsrør, tilsæt 90 μl NKO og 10 μl PCO til det positive kontrol (PC) ekstraktionsrør (hvis ekstraktionskontroller leveres til PCR-undersøgelser).6

6. Luk lågene tæt, bland grundigt og vortex dråberne.

Placér rørene i en termostat med en temperatur på 64 °C i 1 time, og bland jævnligt med vortex (5 gange hvert 10.-12. minut). Inkubation tillades i 12 timer ved en temperatur på 60 °C.

7. Pelleter uopløste prøvepartikler ved centrifugering i 5 minutter ved 10 tusind g (for eksempel 12 tusind rpm for en MiniSpin mikrocentrifuge, Eppendorf Manufacturing Corporation).

8. Tag supernatantvæsken i et volumen på 200–350 µl meget forsigtigt (undgå suspenderede partikler og fedtdråber) ved hjælp af separate spidser med filtre og overfør til nye rør. Sedimenter dråberne ved hvirvel.

9. Resuspender den universelle sorbent under kraftig omrøring med en vortex. Tilsæt 25 µl resuspenderet universel sorbent til hvert rør med en separat spids og luk lågene tæt.

Bland med vortex, lad stå på en rist i 10 minutter, omrør hvert 2. minut.

Det er muligt at ændre volumen af ​​test- og kontrolprøver, se instruktionerne for det brugte sæt reagenser til amplifikation.

Form 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / side 9 af 15

18.Gentag vaskeproceduren efter afsnittene. 15-16, fjern supernatanten helt.

19. Placer reagensglassene med åbne låg i en termostat med en temperatur på 64 °C i 5-10 minutter for at tørre den universelle sorbent.

20. Tilsæt 50–100 μl elueringsbuffer B i rørene (se instruktionerne for det anvendte amplifikationsreagenssæt).

Bland med vortex indtil sorbenten er fuldstændig resuspenderet. Anbring i en termostat ved 64 °C i 5-10 minutter under omrøring med jævne mellemrum (en gang i minuttet) ved hjælp af en hvirvel.

Oprenset DNA kan opbevares ved en temperatur på 2 til 8 °C i en uge, ved en temperatur på minus 24 til minus 16 °C i 6 måneder og ved en temperatur, der ikke overstiger minus 68 °C i et år. For at gøre dette er det nødvendigt, uden at fange sorbenten, at overføre supernatantvæsken til et nyt reagensglas.

Form 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / side 10 af 15

EKSTRAKTION AF DNA FRA FØDEVARER, BIOLOGISKE TILSÆTNINGSSTOFFER,

DYREFODER ELLER PLANTERÅVARER

OPMÆRKSOMHED! For proceduren til klargøring af biologisk materiale til DNA-ekstraktion og volumen af ​​testprøven, se instruktionerne til det anvendte amplifikationsreagenssæt.

1. Opvarm lyseringsreagensbufferen og vaskeopløsning 1, hvis de blev opbevaret ved en temperatur på 2 til 8 °C, ved en temperatur på 64 °C, indtil krystallerne er fuldstændigt opløst.

2. Anbring 1,5 ml rør med forbehandlede testprøver i et stativ (for prøvevolumen/-mængde, se instruktionerne til det anvendte amplifikationsreagenssæt).

3. Forbered et 1,5 mL engangspolypropylenrør med en skrue- eller tætsluttende hætte til den negative ekstraktionskontrol (EC). Tilsæt 100 µl OKO til reagensglasset.

4. Tilsæt 400 µl buffer til lyseringsreagens og 17 µl lyseringsreagens til reagensglassene med testprøver og TC.

5. Luk lågene tæt, bland grundigt og vortex dråberne.

Placer rørene i en termostat med en temperatur på 64 °C i 1 time, og bland dem med jævne mellemrum med vortex (5 gange hvert 10.–12. min.), eller brug en rystertermostat.

6. Pelleter uopløste prøvepartikler ved centrifugering i 5 minutter ved 10 tusind g (f.eks. 12 tusind rpm for en MiniSpin mikrocentrifuge, Eppendorf Manufacturing Corporation).

7. Vælg det nødvendige antal nye engangs 1,5 ml polypropylenrør med skrue eller tætsluttende hætter.

8. Resuspender den universelle sorbent under kraftig omrøring med en vortex. Tilsæt 25 µl resuspenderet universel sorbent til hvert rør med en separat spids og luk lågene tæt.

9. Tag supernatantvæsken i et volumen på 200–350 µl fra rørene med lyserede prøver meget forsigtigt (undgå indtrængning af suspenderede partikler og fedtdråber) ved hjælp af separate spidser med filtre og overfør til rør med en sorbent. Bland med vortex, lad stå på stativet i 10 minutter, omrør hvert 2. minut.

Form 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / side 11 af 15

10. Centrifuger rørene i en mikrocentrifuge i 1 minut ved 2 tusind g (f.eks. 5 tusind rpm for en MiniSpin mikrocentrifuge, Eppendorf Manufacturing Corporation).

11. Uden at opfange sorbenten fjernes supernatantvæsken fra hvert rør med en separat spids uden et filter på 200 µl ved hjælp af en vakuumsug.

12. Tilsæt 300 μl vaskeopløsning 1 til reagensglassene, luk lågene tæt, og vortex indtil den universelle sorbent er fuldstændig resuspenderet.

13.Centrifuger rørene i en mikrocentrifuge i 1 minut ved 2 tusind g.

14. Uden at fange sorbenten fjernes supernatantvæsken fra hvert rør med en separat spids uden et filter på 200 µl ved hjælp af en vakuumsugeanordning.

15. Tilsæt 500 μl vaskeopløsning 2 til reagensglassene, luk lågene tæt, og vortex indtil den universelle sorbent er fuldstændig resuspenderet

16. Centrifuger rørene i en mikrocentrifuge i 1 minut ved 7 tusinde g (for eksempel 10 tusind rpm for en MiniSpin mikrocentrifuge, Eppendorf Manufacturing Corporation).

17. Uden at opfange sorbenten fjernes supernatantvæsken fra hvert rør med en separat 200 µl spids uden filter ved hjælp af en vakuumaspirator.

18.Gentag vaskeproceduren efter afsnittene. 15-16, fjern supernatanten helt.

19. Placer reagensglassene med åbne låg i en termostat med en temperatur på 64 °C i 5-10 minutter for at tørre den universelle sorbent.

20. Tilsæt 50 µl elueringsbuffer B til reagensglassene. Bland med vortex, indtil sorbenten er fuldstændig resuspenderet. Anbring i en termostat ved 64 °C i 5-10 minutter under omrøring med jævne mellemrum (en gang i minuttet) ved hjælp af en hvirvel.

21.Centrifuger rørene i en mikrocentrifuge i 1 minut ved 10 tusind g. Supernatanten indeholder oprenset DNA. Prøver er klar til PCR.

Oprenset DNA kan opbevares ved en temperatur på 2 til 8 °C i en uge, ved en temperatur på minus 24 til minus 16 °C i 6 måneder og ved en temperatur Form 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12 /27/16 / side 12 af 15 ikke højere end minus 68 °C hele året. For at gøre dette er det nødvendigt, uden at fange sorbenten, at overføre supernatantvæsken til et nyt reagensglas.

HOLDBARHED, TRANSPORT OG OPBEVARINGSBETINGELSER.

Bedst før dato. 12 måneder Udløbne reagenssæt kan ikke bruges. Udløbsdatoen for åbnede reagenser svarer til den udløbsdato, der er angivet på etiketterne for uåbnede reagenser, medmindre andet er angivet i instruktionerne.

Transport. Reagenssættet bør transporteres ved en temperatur på 2 til 8 C i højst 5 dage i termiske beholdere indeholdende kolde elementer, alle typer dækket Køretøj. Ved modtagelsen adskilles i overensstemmelse med de angivne opbevaringstemperaturer.

Opbevaring. Opbevar reagenssættet ved en temperatur på 2 til 25 C, undtagen lysereagenset. Opbevar lyseringsreagenset i køleskabet ved en temperatur på 2 til 8 C.

Kølekamre skal give regulerede temperaturforhold.

Lyseopløsning 30 cm 3,

Vaskeopløsning 1 30 cm 3,

Koncentrat til rengøringsopløsning 2 20 cm 3,

Sorbent suspension 2 cm 3,

DNA-elueringsbuffer 4 cm3.

Driftsprocedure:

Forbered rengøringsopløsning 2 ved at blande 20 cm 3 af koncentratet fra sættet, 80 cm 3 destilleret vand og 100 cm 3 96 % ethanol i en separat flaske. Opbevar løsningen kl stuetemperatur

i en tætskruet flaske.

Kontroller tilstanden af ​​sorbenten - når den bundfældes, skal den fylde cirka halvdelen af ​​suspensionens volumen.

Tilsæt 15 - 20 µl resuspenderet sorbent, bland godt med vortex, anbring på et stativ i 5-7 minutter for fuldstændig sedimentering af sorbenten.

Sedimenter sorbenten i en mikrocentrifuge i 30 sekunder ved 3-8 tusind rpm. Tag supernatanten fra hvert rør ved hjælp af en separat spids (det er praktisk at bruge en vakuumsugning).

Tilsæt 300 µl vaskeopløsning 1, bland med vortex, indtil sorbenten er fuldstændig resuspenderet (hvis sorbenten nedbrydes dårligt, bryd den op med en pipette), sedimenter i en centrifuge ved 4-8 tusind rpm i 30 sekunder. Saml supernatanten fra hvert rør ved hjælp af en separat spids.

Tilsæt 800 μl vaskeopløsning 2, vortex indtil sorbenten er fuldstændig resuspenderet, sedimenter i en mikrocentrifuge ved 6-10 tusind rpm i 30 sekunder, og opsaml supernatanten.

Gentag trin 6, vælg omhyggeligt supernatanten, tør sorbentsedimentet i en termostat ved 65 °C i 5 minutter.

Resuspender sorbenten i 30-40 μl elueringsbuffer, anbring i en termostat ved 65°C i 5 minutter, ryst periodisk med vortex.

Sedimenter i en mikrocentrifuge ved maksimal hastighed i 1 minut.

Prøven er klar til PCR. Supernatanten indeholder oprenset DNA.

Som en negativ kontrol under DNA-ekstraktionstrinnet er det nødvendigt at bruge saltvand eller deioniseret vand.

Effektiviteten af ​​DNA-ekstraktion ved hjælp af DNA-sorb-PCR-kittet er 30 – 60 %.

Klinisk materiale	Plasma, serum	Skrabning, sperm, svælgvask, urin	Biopsi, blod, afføring
Antal pipetteringer
Sorbent volumen
Sorbentaflejringshastighed	8 tusind rpm	6 tusind rpm	3-4 tusind rpm
Elueringsvolumen
DNA-ekstraktionseffektivitet

5.2. Trin 2. Opsætning af PCR-sammensætning af kittet til PCR-amplifikation:

5x reaktionsbuffer 1000 µl (viskos, gennemsigtig blå opløsning)

Deioniseret vand.2000 µl

Blanding af nukleotider.500 µl

Taq polymerase.100 µl

Primerblanding.500 µl

Voks til PCR.2000 µl

Positiv kontrol: 100 µl

Negativ kontrol 100 µl

Mineralolie 4000 µl

Sættet opbevares ved minus 20°C i et år.

Den hurtige mikrokolonne-DNA-ekstraktionsmetode er designet til ekstraktion af totalt DNA fra blod, plasma, spyt, urin, cellekulturer og eventuelle cellepelleter i buffer. Den høje renhed af det isolerede DNA gør det muligt at bruge det til alle typer analyser.

isoleringstiden varierer fra 30 til 45 minutter afhængigt af antallet af prøver;

• effektiv binding af DNA til søjlemembranen giver dig mulighed for at opnå det højeste udbytte af DNA fra prøven;
• en høj grad af oprensning opnås takket være den optimerede sammensætning af komponenterne i lyserings- og vaskeopløsningerne;
• signifikant reduceret fragmentering og tab af DNA under vask sammenlignet med andre sorbentekstraktionsmetoder;
• det er muligt at koncentrere DNA ved at reducere volumenet af elueringsopløsningen;
• DNA-ekstraktion på søjler reducerer forbruget af yderligere plastik væsentligt;
• maksimal prøvevolumen - 200 µl;
• sættet indeholder Proteinase K;
• renheden af ​​det isolerede DNA er 1,8-1,9 ifølge forholdet A260/A280;
• mængden af ​​ekstraheret DNA afhænger af prøvens type og mængde. DNA-udbyttet fra 200 µl blod er i gennemsnit 5-6 µg.

Sæt af reagenser til isolering af genomisk DNA "DNA-Extran"

Ved at bruge kits til genomisk DNA-isolering af DNA-Extran-serien kan du isolere DNA fra en række biologiske materialer: blod, kulturer af bakterie- og dyreceller, friske, frosne eller tørrede væv fra dyr og planter.

• fuldstændig DNA-ekstraktion fra celler, minimere DNA-tab og fragmentering under oprensning;
• det isolerede DNA har højt niveau renhed (forhold A260/A280 = 1,8-1,9) og egnet til PCR, restriktionsfordøjelse, hybridisering og andre undersøgelser;
• sættene indeholder ikke potentielt farlige komponenter såsom phenol og chloroform, kræver ikke store mængder plastik og genererer ikke giftigt affald.

Sæt af reagenser til DNA-ekstraktion på magnetiske partikler "M-Sorb-Tube"

Tilpasset til isolering af mykobakterielt DNA fra sputum, bronchial skylninger, cerebrospinalvæske, ekssudat, punctate, biopsi, urin, udflåd fra kønsorganerne og cellekulturer. Foreløbig behandling af klinisk materiale udføres i overensstemmelse med standardprocedurer for prøveforberedelse til mikrobiologiske undersøgelser (ordre nr. 109 fra Sundhedsministeriet i Den Russiske Føderation af 21. marts 2003 "Om forbedring af anti-tuberkuloseforanstaltninger i Den Russiske Føderation", Bilag 11 "Instruktioner for ensartede metoder til mikrobiologisk forskning til påvisning, diagnosticering og behandling af tuberkulose"). For at inaktivere klinisk materiale anbefaler vi at bruge den inaktiverende opløsning A, som vi har udviklet.

Opløsning A dræber mykobakterier inden for 12 timer og desinficerer klinisk materiale, som kan bruges til yderligere analyse (DNA-ekstraktion, PCR, etc.). Opløsning A er tilpasset specifikt til behandling af sputum og erstatter fuldstændigt standardproceduren ved brug af NaOH-NALC-opløsning og har exceptionelle mucolyserende egenskaber. Inaktiveringsopløsning A øger DNA-udbyttet sammenlignet med standard NaOH-NALC prøveforberedelse.

Isoleringsteknikken omfatter: DNA-lyse med guanidin isothiocyanat, DNA-sorption på magnetiske partikler DNA-udfældning ved centrifugering, vasketrin og DNA-eluering. Kan bruges til at isolere DNA fra andre mikroorganismer.

brugen af ​​silicagel-coatede magnetiske partikler som sorbent er et mere teknologisk avanceret og bekvemt format sammenlignet med andre sorbenter og giver mulighed for maksimal standardisering og automatisering af DNA-ekstraktionsteknikken;

En intern positiv kontrol (IPC) tilsættes til hver testprøve tilstedeværelsen/fraværet af RT-PCR-inhibitorer og effektiviteten af ​​DNA-ekstraktion bestemmes af IPC-amplifikationsreaktionen.

Reagenssæt til DNA-ekstraktion fra fødevarer og fødevareråvarer

"Sorb-GMO-A" og "Sorb-GMO-B" reagenssæt er designet specifikt til DNA-ekstraktion fra plantematerialer, madvarer og foder. Begge sæt bruger siliciumsorbent til DNA-oprensning. "Sorb-GMO-A" indeholder guanidinchlorid som lyseringsmiddel, "Sorb-GMO-B" er et ionisk detergent CTAB, som giver maksimalt DNA-udbytte fra plantekomponenter. Karakteristiske træk Fordelene ved Sorb-GMO-A-sættet er hastigheden af ​​DNA-ekstraktion og fraværet af chloroform, hvilket gør arbejdet med sættet mere sikkert.

Sæt af reagenser til DNA-ekstraktion fra vandprøver (på magnetiske partikler) "M-Sorb-Leg"

Designet til isolering af Legionella DNA fra vandområder miljø(køletårne, svømmebassiner, vandlande, varmt- og koldtvandsforsyningssystemer). Den minimale isolerede koncentration af Legionella er 100 celler pr. 0,5 liter prøve.

"M-Sorb-Leg"-sættet fremstilles i to modifikationer: "M-Sorb-Leg1000" til vandprøver med et volumen på 1-1000 ml og "M-Sorb-Leg1" til vandprøver med et volumen på op til 1000 ml. 1 ml. M-Sorb-Leg1000-sættet giver vandfiltrering ved hjælp af et polycarbonatfilter.

M-Sorb-Leg reagenssættet giver dig mulighed for at slippe af med PCR-hæmmere, der findes i stærkt forurenede vandprøver;

• DNA-isoleringsteknikken er baseret på sorption af DNA på silicagel-coatede magnetiske partikler efterfulgt af udfældning med et udfældningsreagens. Kombinerer fordelene ved sorptionsmetoder og totaludfældningsmetoden;
• En intern positiv kontrol (IPC) tilsættes til hver testprøve tilstedeværelsen/fraværet af RT-PCR-hæmmere bestemmes af IPC-amplifikationsreaktionen.

Sæt af reagenser til DNA-ekstraktion fra miljøobjekter (på magnetiske partikler) "M-Sorb-OOM"

M-Sorb-OOM reagenssættet er beregnet til isolering af DNA fra miljøobjekter (jord, vand, dyrekroppe osv.), der mistænkes for at være inficeret med særligt farlige mikroorganismer (DOM), for at forberede dem til efterfølgende analyse pr. RT-PCR. Isoleringsproceduren svarer til den, der er beskrevet for M-Sorb-Leg-sættet.

Sæt af reagenser til RNA-isolering "RNA-Extran"

Sættet er beregnet til at isolere RNA fra blod, vævsfragmenter og cellekulturer. RNA'et opnået under anvendelse af RNA-Extran-kittet kan bruges både til RT-PCR og til hybridiseringsanalyse, in vitro-translation og kloning.

Princippet for RNA-isolering er baseret på sur phenolekstraktion ifølge Khomchinsky, hvor kun RNA forbliver i den vandige fase, og DNA i kompleks med proteiner går over i den organiske fase. Guanidinthiocyanat bruges som et isolerende og denaturerende middel til cellulære nukleaser.

giver dig mulighed for at opnå højt oprenset RNA, fri for DNA-urenheder;

giver fuldstændig ekstraktion af RNA fra fuldblod, vævsfragmenter og cellekulturer;

giver dig mulighed for at opnå ubeskadiget RNA;

• RNA-isoleringstid - 1 time.

Katalognummer	Navn	antal reaktioner
EX-509	Sæt af reagenser "DNA-Extran-1" til isolering af genomisk DNA fra fuldblod	100
EX-511	Sæt med reagenser "DNA-Extran-2" til DNA-ekstraktion fra dyre- og menneskevæv	100
EX-512	Sæt af reagenser "DNA-Extran-3" til DNA-ekstraktion fra bakteriekulturer	100
EX-513	Sæt af reagenser "DNA-Extran-4" til DNA-ekstraktion fra plantevæv	100
EX-514	Sæt af reagenser "K-Sorb" til isolering af totalt DNA på søjler (fra blod, spyt, urin, cellekulturer, afskrabninger af epitelceller)	100
EX-515	Sæt af reagenser "RNA-Extran" til isolering af RNA fra blod, væv, cellekulturer	50
OM-505	Sæt af reagenser "M-Sorb-Tub" til DNA-ekstraktion fra kliniske prøver og cellekulturer (på magnetiske partikler)	50 eller 100
GM-502-50	"SORB-GMO-A" (guanidin + sorbent) Sæt af reagenser til DNA-ekstraktion fra plantematerialer og fødevarer	50
GM-503-50	"SORB-GMO-B" (CTAB+sorbent) Sæt af reagenser til DNA-ekstraktion fra plantematerialer og fødevarer	50
OM-506	Sæt med reagenser "M-Sorb-Leg1000" til isolering af Legionella DNA fra vandprøver op til 1000 ml (på magnetiske partikler leveres filtre separat)	50 eller 100
OM-507	Sæt af reagenser "M-Sorb-Leg1" til isolering af Legionella DNA fra vandprøver op til 1 ml i volumen (på magnetiske partikler)	50 eller 100
OOM-502	Sæt af reagenser "M-sorb-OOM" til DNA-ekstraktion fra miljøgenstande (på magnetiske partikler)	50 eller 100

Ordreinformation

Navn	Bind	Produktion	Metode	Kat.nr.
"GMO-MagnoSorb" (guanidin + magnetisk sorbent) Sæt af reagenser til DNA-ekstraktion fra plantematerialer og fødevarer	50 tildelinger	Synthol	Realtids PCR	GM-505-50
"SORB-GMO-A" (guanidin + sorbent) Sæt af reagenser til DNA-ekstraktion fra plantematerialer og fødevarer	50	Synthol	Realtids PCR	GM-502-50-50
"SORB-GMO-B" (CTAB+sorbent) Sæt af reagenser til DNA-ekstraktion fra plantematerialer og fødevarer	50	Synthol	Realtids PCR	GM-503-50-50
Sæt af reagenser "Amplitub-RV" kit nr. 1 ("M-Sorb-Tub") til isolering af mykobakterielt DNA fra kliniske prøver og kulturceller (på magnetiske partikler)	50	Synthol	Realtids PCR	OM-505
Sæt af reagenser "DNA-Extran-1" til isolering af genomisk DNA fra fuldblod	100	Synthol	Realtids PCR	EX-509-100
Sæt med reagenser "DNA-Extran-2" til DNA-ekstraktion fra dyre- og menneskevæv	100	Synthol	Realtids PCR	EX-511
Sæt af reagenser "DNA-Extran-3" til DNA-ekstraktion fra bakteriekulturer	100	Synthol	Realtids PCR	EX-512-100
Sæt af reagenser "DNA-Extran-3" til DNA-ekstraktion fra plantevæv	100	Synthol	Realtids PCR	EX-513-100
Sæt af reagenser "K-Sorb" til isolering af totalt DNA på søjler (fra blod, spyt, urin, cellekulturer, afskrabninger af epitelceller)	100	Synthol	Realtids PCR	EX-514-100
	48 reaktioner	Synthol	Realtids PCR	GM-443-48
Sæt af reagenser "Soya / 35S+FMV / NOS screening"	50 reaktioner	Synthol	Realtids PCR	GM-416-50